Alcohol Ácido Z.N.

APLICACIÓN

Para su uso de diagnóstico in vitro en el método de coloración Ziehl Neelsen de bacterias BAAR.

MUESTRA

Extensiones procedentes de cultivos bacterianos. Muestras procedentes de diversos fluidos corporales: exudados, fluidos pulmonares, sedimentos de orina etc. Manipular las muestras con precaución por su capacidad potencialmente infeccioso.

MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS

• Soporte de coloración
• Asa estéril Microscopio
• Aceite de inmersión
• Lámina Portaobjetos

PROCEDIMIENTO

1. Fijar el extendido sobre la lámina de modo uniforme, hasta lograr un extendido que cubra el resto de la lámina, sin llegar hasta el borde de ella.

2. Deje secar el extendido a temperatura ambiente cerca del mechero. No acelere el secado pasando las láminas sobre la llama, esto daña el extendido y dificulta la observación al microscopio.

3. Una vez secos los extendidos, páselos rápidamente sobre la llama del mechero tres veces, con el extendido hacia arriba con el fin de fijar la muestra.

4. Cubrir el extendido con el colorante Fucsina Fenicada de Ziehl N., caliente las láminas por debajo pasando la llama del mechero y cuando se produzcan vapores, empiece a contar 5 minutos. Retire el mechero y cuando los vapores desaparezcan, caliente nuevamente, haga esto 3 veces durante 5 minutos. Evite que el colorante se hierva o se seque, si esto pasa agregue más colorante y continúe produciendo los vapores. Deje enfriar y lave cuidadosamente con agua limpia

5. Cubrir la superficie del extendido con Alcohol Acido de Ziehl N. y dejar actuar 1 a 3 minutos, lavar con agua corriente cuidando de no desprender la película que se formó. Si el extendido conserva el color rojo o rosado vuelva a agregar alcohol-ácido como lo hizo anteriormente y lave nuevamente.

6. Cubra la superficie del extendido con colorante azul de metileno de Ziehl N., durante Un 1 minuto y lavar con agua.

7. Secar al ambiente y lea al microscopio.

RESULTADOS

Los bacilos alcohol resistentes (BAAR) aparecen de color rojo sobre un fondo azul claro mientras que las otras células toman distintas tonalidades de azul.

NOTAS AL PROCEDIMIENTO

• La técnica descrita anteriormente puede modificarse de acuerdo con las preferencias del operador para lograr mayor o menor intensidad de coloración, lo cual implica variaciones en los tiempos de tinción, decoloración, lavado, etc.

• Agua altamente clorada puede alterar la coloración.

• Un lavado excesivo después del colorante fucsina puede producir resultados falsos negativos en microorganismos ácido-alcohol resistentes.

• Un exceso de lavado después de utilizar el colorante de contraste puede disminuir la coloración de los microorganismos no ácido-.alcohol resistentes.