Características Fucsina de Gram
Aplicación
Para su uso in vitro en el método de coloración Gram para la diferenciación de bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Materiales requeridos no suministrados
- Soporte de coloración
- Agua de grifo
- Asa estéril
- Microscopio
- Aceite de inmersión
- Lámina Portaobjetos
Procedimiento
1. Prepare una extensión fina, uniforme de muestra y seque al aire.
2. Fije al calor y deje enfriar.
3. Cubra el portaobjetos con Violeta de Gram y deje reposar durante 5 segundos a 1 minuto y lave cuidadosamente con agua de grifo.
4. Cubra el frotis con lugol de Gram y deje reposar durante 10 segundos a 1 minuto y lave con agua.
5. Decolore suavemente con alcohol acetona de 5 - 30 segundos y lave con agua de grifo.
6. Cubrir con Fucsina o safranina durante 5 a 30 segundos y lave con agua corriente.
7. Deja secar al ambiente y examinar el frotis coloreado con aceite de inmersión.
Notas al procedimiento
El procedimiento se puede modificar de acuerdo con las preferencias del usuario para lograr una intensidad de color más débil o más fuerte, cambiando los tiempos de tinción, lavado, etc. Los frotis o cultivos viejos podrían dar resultados atípicos, es por esto que se recomiendan utilizar cultivos o frotis recientes (18-24 horas). Es muy importante controlar la fijación por calor (unos pocos segundos), cualquier exceso de calentamiento podría producir resultados erróneos. El agua del grifo altamente clorada podría debilitar la contratinción.
Resultados
Bacterias Gram positivas: Color violeta - azul Bacterias Gram negativas: Color rojo- rosado
Resultados alterados
Corresponden a errores en la técnica durante cualquiera de los pasos: Frotis → fijación → coloración y decoloración → secado y observación. ALTERACIONES EN LA COLORACION
• Lamina rayada o sucia.
• Extendidos muy gruesos.
• Tiempo tinción excesivamente prolongado.
• Lavado insuficiente.
• Precipitado en el colorante.
Almacenamiento y estabilidad
Almacenar a temperatura de ambiente entre 10 – 35°C. protegido de la luz.
Estabilidad
El reactivo es estable hasta la fecha de vencimiento manteniendo protegido de la luz y bien cerrado.
Recomendaciones
Para evitar errores, la aplicación debería ser realizada por personal especializado. No mezclar con otras marcas ni otros lotes. No introduzca pipetas o goteros. Para uso in vitro IVD.