Violeta de Gram

Características Violeta de Gram

Aplicación

Para su uso in vitro en el método de coloración Gram para la diferenciación de bacterias Gram positivas y Gram negativas. 

Materiales requeridos no suministrados

• Soporte de coloración
• Agua de grifo
• Asa estéril
• Microscopio
• Aceite de inmersión
• Lámina
• Portaobjetos

Procedimiento

1. Prepare una extensión fina, uniforme de muestra y seque al aire.

2. Fije al calor y deje enfriar.

3. Cubra el portaobjetos con Violeta de Gram y deje reposar durante 1 minuto y lave cuidadosamente con agua de grifo.

4. Cubra el frotis con lugol de Gram y deje reposar durante 1 minuto y lave con agua.

5. Decolore suavemente con alcohol acetona de 10 - 30 segundos y lave con agua de grifo.

6. Cubrir con Fucsina o safranina durante 10 a 30 segundos, y lave con agua corriente.

7. Deja secar al ambiente y examinar el frotis coloreado con Aceite de inmersión.

Notas al procedimiento

El procedimiento se puede modificar de acuerdo con las preferencias del usuario para lograr una intensidad de color más débil o fuerte, cambiando los tiempos de tinción, lavado, etc. Los frotis o cultivos viejos podrían dar resultados atípicos, es por esto que se recomiendan utilizar cultivos o frotis recientes (18-24 horas). Es muy importante controlar la fijación por calor (unos pocos segundos), cualquier exceso de calentamiento podría producir resultados erróneos. El agua del grifo altamente clorada podría debilitar la contratinción.

Resultados

Bacterias Gram positivas: Color violeta - azul Bacterias Gram negativas: Color rojo- rosado

Resultados alterados

Corresponden a errores en la técnica durante cualquiera de los pasos: Frotis → fijación → coloración y decoloración → secado y observación.

Alteraciones en la coloración

• Lamina rayada o sucia.
• Extendidos muy gruesos.
• Tiempo tinción excesivamente prolongado.
• Lavado insuficiente.
• Precipitado en el colorante.

Almacenamiento y estabilidad

Almacenar a temperatura de ambiente entre 10 – 35°C. protegido de la luz.

Estabilidad

El reactivo es estable hasta la fecha de vencimiento manteniendo protegido de la luz y bien cerrado.

Recomendaciones

Para evitar errores, la aplicación debería ser realizada por personal especializado. No mezclar con otras marcas ni otros lotes. No introduzca pipetas o goteros.